کلون کردن ژن جهش یافته آنتی ژن ایمنی بخش باسیلوس آنتراسیس(PA) در باسیلوس سوبتیلیس

سابقه و هدف: آنتی  ­ژن ایمنی بخش باسیلوس آنتراسیس پروتئینی با خاصیت اتصال به گیرنده­ های سطح تمام سلول­ های بدن انسان می­ باشد. در سطح سلول ­های سرطانی گیرنده اختصاصی فعال کننده یوروکینازی پلاسمینوژن (uPA) ایجاد می ­شود که در سطح سایر سلول­ های نرمال بدن مشاهده نمی ­شوند. هدف از انجام این تحقیق تغییر جایگاه اتصال موجود بر روی PA با جهش ­زایی مستقیم می ­باشد به نحوی که این پروتئین فقط بتواند به سلول ­های سرطانی متصل گردد. مواد و روش ­ها: در طی این تحقیق پلاسمید pMNA1 حاوی ژن PA به روش لیز قلیایی ازمیزبان خود جدا سازی شد. در ادامه با استفاده از پرایمر های فسفریله شده و استفاده از روش  PCR هم ­پوشان جهش هدفدار بر روی ژن PA صورت پذیرفت. در ادامه قطعه حاصله بطور مستقیم بر روی ناقل PTZ57R کلون و به E.coli سویه DH5α انتقال یافت. با استفاده از آنزیم ­های برش دهنده KpnI و SalI ژن PA جهش یافته جدا و بر روی ناقل pWB980 انتقال داده شد. در آخر با استفاده از روش الکتروپوریشن به B.subtilis سویه WB600 انتقال یافت. یافته ­ها: طی این تحقیق در توالی ژن PA با روش SOE PCR جهش ایجاد کرده که در پی آن کد ژنتیکی اسید ­آمینه 194 تغییر کرد. جهش ایجاد شده با تعیین ترادف بازی تأیید گردید. نتیجه­ گیری: سرطان مشهور به بیماری غیر قابل درمان و مرگ ­آور است. یکی از روش­ های درمان سرطان استفاده از توکسین­ های باکتریایی است البته در صورتی­که فقط به سلول ­های سرطانی آسیب برساند. لذا با استفاده از پروتئین تغییر یافته PA که فقط به سلول ­های سرطانی متصل می گردد می ­توان امیدی تازه در درمان سرطان ایجاد کرد.